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品牌 | 其他品牌 | 貨號 | BFNC86033 |
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規格 | 20x100ul/100x100ul | 供貨周期 | 現貨 |
主要用途 | 僅用于科研 | 應用領域 | 醫療衛生,生物產業 |
F-DH5α快速轉化感受態細胞
產品規格CAT#: BFNC86033-01(20×100ul)/BFNC86033-02(100×100ul)
F-DH5α: 100μl/支
pUC19 (control vector,10pg/μl): 10μl
保存條件(保質期): -80℃(6個月)
基因型
F-φ80 lac ZΔM15 Δ(lacZYA-arg F) U169 endA1 recA1 hsdR17(rk-,mk+) supE44λ- thi -1 gyrA96 relA1 phoA
產品說明
DH5α菌株是實驗室常用的感受態細胞。 缺失核酸內切酶 (endA),提高了質粒DNA的產量和質量;重組酶缺陷型 (recA)減少插入片段的同源重組概率,保證了插入DNA 的穩定性;lacZΔM15的存在使DH5α可用于藍、白斑篩選。
青旗生物生產的F-DH5α感受態細胞經特殊工藝制作,無需42℃熱激,37℃孵育步驟,只需冰浴,10min內完成轉化、涂板操作,pUC19質粒檢測轉化效率可達1~5×10 8cfu/μg DNA。
F-DH5α快速轉化感受態細胞
快速轉化操作方法 (10min)
1. 提前15分鐘將用到的篩選培養基平板拿到37℃預熱。
2. F-DH5α感受態細胞從-80℃拿出,迅速插入冰中,5分鐘后待菌塊融化,加入目的DNA(質?;蜻B接產物)并用手bo打EP管底輕輕混勻,,冰中靜置5分鐘。
3. 用200 μl槍將感受態細胞-DNA混合物轉移到已經37℃預熱的LB培養基上,涂均勻,表面無水漬。
4. 將平板倒置放于37℃培養箱過夜培養。如果進行藍白斑篩選操作,將平板放37℃培養至少15h。
快速熱激轉化操作方法 (25min,可提高轉化效率)
1. F-DH5α感受態細胞從-80℃拿出,迅速插入冰中,5分鐘后待菌塊融化,加入目的DNA (質?;蜻B接產物)并用手bo打EP管底輕輕混勻,,冰中靜置5分鐘。
2. 42℃水浴熱激45秒,迅速放回冰上并靜置2分鐘 (晃動會降低轉化效率)。加入700 μl 不含抗生素的LB,37℃,200 rpm 復蘇10分鐘,涂板 (均勻,表面無水漬)。
3. 將平板倒置放于37℃培養箱過夜培養。如果進行藍白斑篩選操作,將平板放37℃培養至少15h。
注意事項
1. F-DH5α快速轉化感受態細胞也可進行熱激操作,對于>7 kb質粒的構建,為了提高轉化效率可按以下步驟操作:F-DH5α感受態細胞從-80℃拿出,插入冰中,5分鐘后,加入目的DNA并用手bo打EP管底輕輕混勻,冰中靜置20分鐘。42℃水浴熱激45秒,迅速放回冰中靜置2分鐘。加入700 μl LB,37℃,200 rpm復蘇30分鐘,涂板。
2. 感受態細胞適宜在冰中緩慢融化。插入冰中8分鐘內加入目標DNA,不可在冰中放置時間過長,長時間存放會降低轉化效率,混入目的DNA時應輕柔操作。
3. F-DH5α快速轉化感受態細胞涂氨芐/羧芐青霉素抗性平板時效率較高,若涂卡那霉素或其他抗生素平板,轉化效率下降(因無孵育步驟,卡那霉素等對菌體毒性較大)。若要提高卡那霉素或其他抗性質粒的轉化效率,可按熱激轉化操作,增加孵育步驟。