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品牌 | 其他品牌 | 貨號 | BFNC86030 |
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規格 | 10x100ul/50x100ul | 供貨周期 | 現貨 |
主要用途 | 僅用于科研 | 應用領域 | 醫療衛生,生物產業 |
JM330化學感受態細胞
產品規格CAT#: BFNC86030-01(10×100ul)/BFNC86030-02(50×100ul)
JM330: 100μl/支
pUC19 (control vector,10pg/μl): 10μl
保存條件(保質期): -80℃(6個月)
基因型
F- φ80 lacZ?M15 ?(lacZYA-argF)U169 recA1 endA1 hsdR17(rk-, mk+) phoA supE44 λ-thi-1 gyrA96 relA1 tonA
產品說明
JM330菌株(即DH5α T1 Phage Resistant),來源于DH5α菌株。在DH5α大腸桿菌基因組中引入tonA,賦予其抗噬菌體T1,T5的能力,即為JM330。JM330菌株的特點是其可以在體內特異性降解甲基化質粒模板,廣泛應用于各種DNA定點突變試驗中。JM330菌株缺失核酸內切酶 (endA1)和重組酶(recA1),提高了質粒DNA的產量和質量; lacZΔM15的存在使JM330可用于藍、白斑篩選。
青旗生物開發的JM330感受態細胞經特殊工藝制作,pUC19質粒檢測轉化效率>1×109 cfu/μg DNA。
JM330化學感受態細胞
操作方法
1. JM330感受態細胞從-80℃拿出,迅速插入冰中,5分鐘后待菌塊融化,加入目的DNA(例如:Dpn I消化產物等)并用手bo打EP管底混勻,冰中靜置25分鐘。
2. 42℃水浴熱激45秒,迅速放回冰上并靜置2分鐘,晃動會降低轉化效率。
3. 向離心管中加入700 μl不含抗生素的無菌培養基 (LB),混勻后37℃,200 rpm復蘇70分鐘。
4. 5000 rpm離心1分鐘收集菌體,留取50 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應抗生素的LB培養基上。
5. 將平板倒置放于37℃培養箱至少15小時。
注意事項
1. 感受態細胞適宜在冰中緩慢融化。插入冰中8分鐘內加入目標DNA,不可在冰中放置時間過長,長時間存放會降低轉化效率。
2. JM330可以對未被Dpn I降 解掉的質粒模板進行進一步的降解,因此可以保證定點突變具有更高的陽性率。
3. 轉化高濃度的質?;駾pn I消化產物可相應減少終用于涂板的菌量。